抗體應用簡介
ELISA的實驗原理是基于抗體/抗原的特異性結合,它不僅能夠對特定的蛋白進行定量分析,還可以研究分子之間的相互作用或其他特性。
將針對靶標的抗體與檢測酶偶聯。在加入底物時,這種酶催化底物生成有色產物。通過分光光度計的測定,便可以知道樣品中抗原的濃度。
WB通常被用來確定樣品間蛋白的相對表達水平,還可以確定目標蛋白的分子量大小,這有利于我們對蛋白的翻譯后修飾過程進行研究。
根據分子量大小的不同,組織或細胞裂解液中的蛋白通過凝膠電泳得以分離。接著,分離的蛋白被轉移到膜上,隨后用抗體來檢測感興趣的蛋白。
IHC揭示了樣本內抗原的組織特異性和亞細胞定位。相比與WB和ELISA,它的定量分析應用較少,但是在完整組織中對于蛋白表達的分析更有優勢 。
IHC染色是通過抗體識別靶蛋白實現的。抗原抗體復合物能夠通過酶促反應或者熒光來實現可視化。這些底物可以直接偶聯到一抗或二抗上。
ICC通常使用熒光標記的抗體來研究蛋白的亞細胞分布。與IHC相比,該技術提供了更高的空間分辨率,因為培養的細胞不會有組織樣本的復雜環境。
在已經固定并通透處理的細胞培養樣本中,抗體和靶蛋白特異性結合,再通過與一抗直接偶聯的熒光素或熒光二抗,使其可視化。用熒光顯微鏡即可對結果信號進行觀察。多個靶標可以使用不同熒光標記的一抗同時進行研究。
流式細胞術是測量細胞某些化學和物理特性的一種手段。參數測量包括細胞大小和細胞表面以及細胞內標記物的表達量。
流式細胞儀測量被標記抗體的熒光。細胞分選(FACS)是一種更復雜的系統,它能量化熒光信號,并將細胞以預先選定的特征(如熒光強度、大小和生存能力),從混合細胞群中分離出來。
免疫沉淀是分離純化單一或復合蛋白的最常用的一種方式。抗體被固定在固相基質(如磁珠/瓊脂糖小球)上,從而從復雜溶液中捕獲抗原。
染色質免疫沉淀(ChIP) 技術用來確定特定蛋白是否與體內特定DNA序列相互作用。
ELISPOT用于檢測如細胞因子和生長因子這樣的分泌蛋白。該技術可以量化和對比各種刺激下的免疫反應。
在96孔板中,細胞生長在帶有抗體包被的PVDF膜或硝化纖維素膜上,分泌蛋白會與抗體結合。抗體-抗原間的相互作用可以通過二抗進行檢測,使得分泌蛋白的親本細胞呈現特定的顏色(一個點=1個細胞)。對膜進行掃描和分析,以定量分泌蛋白的細胞的數量/百分比。
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