長(zhǎng)肽合成技術(shù)
在現(xiàn)代生物學(xué)研究中，經(jīng)常會(huì)用到序列比較長(zhǎng)的多肽，對(duì)于序列中含有60個(gè)以上氨基酸的多肽，通常會(huì)采用基因表達(dá)及SDS-PAGE法來(lái)獲得，但是這種方法周期長(zhǎng)，最終產(chǎn)物分離效果差等，使固相法長(zhǎng)肽合成技術(shù)成為一種需要。肽谷生物經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的摸索與積累，對(duì)合成工藝及方法不斷優(yōu)化，解決了長(zhǎng)肽合成難，純化難的問(wèn)題，我們長(zhǎng)肽合成成功率高，質(zhì)量穩(wěn)定。
長(zhǎng)肽合成中，我們一直面臨一個(gè)矛盾，即合成中隨著序列的增長(zhǎng)，縮合反應(yīng)空間位阻增大，為了反應(yīng)完全，需要增加反應(yīng)時(shí)間；但是隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，其產(chǎn)生的副反應(yīng)就越多， 一些缺殘基的目標(biāo)肽就隨之產(chǎn)生。這些缺殘基的肽鏈也是長(zhǎng)肽合成過(guò)程中所產(chǎn)生的主要雜質(zhì)。 因此，長(zhǎng)肽的合成過(guò)程中，我們需要克服的主要困難是探索更優(yōu)質(zhì)的反應(yīng)條件和反應(yīng)方法，從而使氨基酸縮合反應(yīng)進(jìn)行的更充分更徹底。同時(shí)縮短反應(yīng)時(shí)間，因?yàn)榉磻?yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，不可控的副反應(yīng)相對(duì)的就越多，副產(chǎn)物就越復(fù)雜。
為此，肽谷生物經(jīng)過(guò)多年的摸索與積累，總結(jié)出以下經(jīng)驗(yàn)：
對(duì)于反應(yīng)時(shí)間實(shí)行精準(zhǔn)靈活的把控：我們?cè)诙嚯暮铣啥嗄甑慕?jīng)驗(yàn)積累，使得我們對(duì)于多肽反應(yīng)時(shí)間能夠精準(zhǔn)把控，在反應(yīng)完全-減少副產(chǎn)物上能夠找到平衡點(diǎn)；
采用微波合成法：對(duì)于合成過(guò)程中出現(xiàn)的一些難以縮合的氨基酸，我們采用微波法進(jìn)行合成，該方法效果顯著，并且大大縮短了反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)減少了兩種主要副產(chǎn)物的產(chǎn)生。
采用片段合成法：當(dāng)某些多肽用常規(guī)合成方法合成困難，并且難以純化時(shí)，我們也會(huì)采用將多肽中某一段的某幾個(gè)氨基酸縮合之后作為一個(gè)整體縮合到肽鏈上去，這種方法也能夠解決許多合成中存在的問(wèn)題。
采用酰肼合成法：酰肼法合成多肽的方法是固相合成的N末端Cys多肽和C末端多肽酰肼之間的化學(xué)選擇性反應(yīng)形成酰胺鍵而實(shí)現(xiàn)多肽連接的方法。該方法根據(jù)肽鏈中Cys的位置，將整條肽鏈分成多條序列分別合成，最終經(jīng)過(guò)液相合縮反應(yīng)得到目標(biāo)肽， 該方法不僅大大縮短了長(zhǎng)肽合成時(shí)間，而且顯著地提高了最終產(chǎn)物純度，因此廣泛適用于含有Cys的長(zhǎng)鏈多肽的合成。
長(zhǎng)肽的特殊性不可避免的導(dǎo)致最后得到的粗品肽組分復(fù)雜，因此，對(duì)于長(zhǎng)肽的HPLC純化也是一項(xiàng)挑戰(zhàn)；我們通過(guò)在amyloid系列多肽純化過(guò)程中，吸取大量經(jīng)驗(yàn)并成功用于長(zhǎng)肽純化，我們通過(guò)采用先進(jìn)儀器，多純化體系混用，反復(fù)分離等經(jīng)驗(yàn)手段，極大提升了我們長(zhǎng)肽純化成功率。
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